随着个体化医疗的快速发展，一次性使用(SU)技术因其多样的优势，在细胞和基因治疗(CGT)领域中得到了日益广泛的应用，但对于可提取物对基于细胞的CAR-T疗法疗法的影响，尤其是与细胞的相互作用，却鲜有关注。本文旨在通过CAR-T流程的风险分析，识别由一次性使用生产组件所带来的风险。
1. 引言
个体化医疗，尤其是嵌合抗原受体(CAR)T细胞疗法，已成为治疗某些疾病的重要手段。CAR-T流程涉及患者T细胞的基因修饰、扩增和再输回，其产品具有高度变异性，为质量属性(CQAs)的定义带来挑战。当前CAR-T制造过程不仅包括细胞收集、修饰和扩增，还涉及病毒载体的生产。SU技术因其成本效益和灵活性，满足了防止交叉污染的需求，但同时也带来了从聚合物材料中浸出物质的风险。
2. 方法
本研究依据国际人用药协调会(ICH)指南Q9，对CAR-T制造中的关键步骤进行了风险分析。研究中考虑了多个因素，包括：
- 接触时间：研究了培养基与SU材料接触时间的增加会导致可提取物浓度的增加，直至达到平衡。
- 表面积-体积比(S/V)：SU材料的表面积与过程流体体积的比率越高，可提取物扩散到过程介质中的速度越快，数量越多。
- 温度、灭菌方法、老化和材料的机械应力：这些因素可能会触发物质的释放。
- 过程模式：例如连续培养或灌流培养，决定了溶解在介质中的可提取物与聚合物材料中的平衡状态。
研究中使用了两种不同的基于细胞的测试系统来覆盖病毒载体制造部分和CAR-T过程本身：
病毒载体生产：使用人胚肾(HEK) 293 T/17SF悬浮细胞进行瞬时转染，这些细胞系适合在无血清培养基中生长，并用于生产第三代慢病毒载体。
CAR-T制造：使用原代T细胞作为基于细胞的测试系统，评估了不同传代的特定生长率，并比较了有无血清条件下的生长情况。。
3. 结果
研究结果揭示了SU材料对CAR-T过程的潜在影响：
可提取物列表：鉴定了几种可提取物，包括增塑剂、抗氧化剂及其降解产物，例如双(2-乙基己基)邻苯二甲酸盐(bDtBPP)和双(2,4-二叔丁基苯基)磷酸酯(DP1)。
下游处理步骤：研究发现，与典型的生物制药产品（例如单克隆抗体）相比，CAR-T过程的下游处理步骤有限，仅限于细胞浓度和洗涤步骤，不能应用过滤步骤。
4. 讨论
潜在风险：研究讨论了SU材料中可提取物对细胞培养过程的潜在负面影响，特别是PVC材料和相应的增塑剂对原代T细胞生长的抑制作用。
独特测试系统：研究强调了为CGT领域开发独特测试系统的必要性，以充分评估SU材料所带来的风险。
改进的测试系统和风险评估：通过改进的测试系统，研究能够更准确地评估SU材料的生物相容性，并提出了对现有风险评估方法的改进，以更好地反映CAR-T过程的特殊性。
5. 结论
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关键步骤：研究识别了CAR-T过程中的关键步骤，特别是细胞扩增和中间产品存储，这些步骤中SU材料的潜在风险最高。
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评估结论：尽管SU材料的使用带来了潜在风险，但通过细致的风险分析和管理措施，可以确保CAR-T疗法的安全性和有效性。
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改进措施：研究建议对SU材料进行更深入的评估，以减少对细胞生长和CAR-T产品性能的潜在影响，并提出了改进的测试系统和风险评估方法。
参考文献
Dana Budde a,b, Elke Jurkiewicz. Risk analysis of leachables in cell and gene therapy using a CAR-T model process. Int J Pharm. 2021 Sep 25:607.
